COMPARAÇÃO ENTRE DUAS TÉCNICAS DE LEITURA DO CKECKERBOARD DNA-DNA HYBRIDIZATION

Abstract

O objetivo deste estudo foi comparar os resultados obtidos por meio de duas técnicas de leitura do teste microbiológico Checkerboard DNA-DNA Hybridization, sendo uma a leitura visual e outra a leitura por um aparelho com capacidade de captação de sinais quimioluminescente. Foram selecionados 30 membranas do teste microbiológico Checkerboard DNA-DNA hybridization, sendo que inicialmente a membrana foi revelada em filme radiográfico (Leitura 1) e posteriormente as mesmas foram inseridas no aparelho Gbox (Syngene, USA) para que os sinais de quimioluminescência fossem absorvidos pela segunda metodologia de leitura (Leitura 2). Desta forma, a mesma membrana foi analisada de duas diferentes maneiras. Para a leitura visual dos filmes radiográficos (Leitura 1), cada sinal produzido por uma determinada sonda na amostra foi comparado em intensidade ao sinal produzido pela mesma sonda nos dois controles contendo 105 e 106 bactérias. Para a leitura pelo aparelho (Leitura 2), as imagens foram analisadas pelo software TotalLab. As concentrações destes sinais foram estimadas comparando com a curva dos controles usando um modelo “logit-log”. Ambos os métodos de leitura, visual ou computadorizada, dos resultados do Checkerboard DNA-DNA Hybridization foram semelhantes em relação aos níveis de contagem, média de proporção das espécies bacterianas e na média de proporção dos complexos bacterianos. Foi observada alteração em apenas uma espécie bacteriana, onde a espécie Parvimonas micros (p<0,05) apresentou níveis mais elevados pela leitura computadorizada em relação a leitura visual. Em relação as alterações nas proporções, observou-se que 3 espécies bacterianas, sendo Actinomyces odontolyticus, Capylobacter rectus e Parvimonas micros apresentaram proporções menores (0,44+0,7, 0,34+0,76 e 0,18+0,31, respectivamente) para o método visual em comparação ao método digital (2,32+3,4, 2,5+2,2 e 5,0+3,5, respectivamente). Em conclusão, o uso do método de digitalização de imagem para análise dos resultados do Checkerboard DNA-DNA hybridization é valido em comparação ao método visual.