COMPARAÇÃO MICROBIOLÓGICA DE DUAS TÉCNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR EM VOLUNTÁRIOS COM PERIODONTITE E DIABETES.

Resumo

Introdução: a periodontite é uma doença infecto-inflamatória causada por microrganismos que colonizam os ambientes supra e subgengivais. Se não tratada, a periodontite pode levar a perda do dente. A diabetes mellitus (DM), considerada um fator de risco para as periodontites, é um grupo de alterações metabólicas ocasionadas pela deficiência na secreção e/ou utilização da insulina. O conhecimento do perfil microbiano subgengival de pacientes com periodontite e DM é necessário para que se possa definir estratégias preventivas e terapêuticas mais efetivas para esses pacientes. O método de diagnóstico utilizado para se identificar a microbiota subgengival tem influência direta nos resultados desses estudos. Objetivo: comparar duas técnicas de biologia molecular comumente utilizadas em estudos de microbiologia periodontal, Checkerboard DNA-DNA hybridization e Polymerase Chain Reaction em tempo real (RT-PCR), na avaliação da microbiota periodontal de voluntários com periodontite crônica generalizada (PCrG) e DM tipo 2. Métodos: foram selecionados sessenta indivíduos com PCrG e DM, e seis amostras de biofilme subgengival foram coletadas em duplicata por indivíduo e avaliadas pelos dois métodos de diagnóstico para a presença/níveis das seguintes espécies bacterianas: Prevotella intermedia, Eubacterium nodatum, Parvimonas micra, Tannerella forsythia, Porphyromonas gingivalis e Treponema denticola. Os dados microbiológicos foram expressos em nível médio de cada espécie (contagem) em cada amostra. Foi utilizada a transformação Box-Cox nos dados originais para posterior análise. Foram calculadas a concordância, sensibilidade e especificidade dos métodos de diagnóstico microbiológicos, usando níveis bacterianos 105 detectados pelo Checkerboard DNA-DNA hybridization como o padrão ouro. Resultados: 720 amostras provenientes de 60 voluntários foram coletadas. 63 amostras foram perdidas durante o processamento e 33 não geraram resultado positivo para nenhuma das bactérias avaliadas. Logo, 624 amostras provenientes de 55 voluntários foram incluídas na análise final do estudo. Os dados de concordância variaram de 61,9% para E. nodatum e 56,1% para P. gingivalis até 34% para T. denticola e 32,7% para P. micra. Valores altos de sensibilidade foram observados para o teste RT-PCR em relação ao Checkerboard DNA-DNA hybridization para todas as espécies avaliadas. A sensibilidade ficou por volta de 80% para a maioria das espécies, com exceção de P. intermedia, que foi de 67%. Em relação aos níveis bacterianos, as espécies que mostraram maior concordância entre os dois testes (<10 pontos de diferença em uma escala de 0-100) foram E. nodatum, T. forsythia e P. gingivalis. Conclusão: os dados do presente estudo sugerem que as duas técnicas de diagnóstico microbiológico estudadas possuem resultados comparáveis quanto a detecção de seis patógenos periodontais. De forma global, as melhores concordâncias foram observadas para as espécies E. nodatum, T. forsythia e P. gingivalis e quando os microrganismos estavam presentes (sensibilidade). No caso de ausência das espécies (especificidade) os resultados foram mais discordantes.